Determination of maromolecular structures using synchrotron radiation for the elucidation of enzymatic activities

Abstract

O foco deste projeto é o design, construção e operação de uma estação experimental dedicada à cristalografia de proteínas no Laboratório Nacional de Luz Síncrotron (LNLS), e sua utilização em estudos estruturais cristalográficos de diversas proteínas. Num primeiro momento, o objetivo é a determinação da estrutura e propriedades da enzima Glucosamina-6-fosfato desaminase de E.coli, a qual, tendo sido já determinada, abriu o campo para a aplicação da linha PCr para um amplo espectro de projetos de pesquisa do Laboratório de Cristalografia de Proteínas e Biologia Estrutural do IFSC/USP e de outros grupos de pesquisa em cristalografia do país. A linha de luz, em fase final de construção e comissionamento, inclue um espelho de raios-X cilíndrico e um monocromador de um cristal curvo, focalizando o alto fluxo da radiação síncrotron no plano horizontal, na posição da aostra. A radiação monocromática será sintonizável entre 2.0A e 1.0A, com comprimento de onda ótimo de 1.6A, escolhido de forma a maximizar o fluxo de fótons obtidos dos bending magnets do anel de armazenamento (1.37GeV). As imagens de difração serão coletadas em um sistema de deteção com placas de imagens com leitura em linha. A estação experimental contará também com sistemas de resfriamento e congelamento de cristais e um laboratório de apoio de bioquímica para cristalização, difusão de átomos pesados em cristais, montagem de cristais, com câmaras termoestabilizadas a 22 C e 4 C. Estas facilidades serão para uso de pesquisadores do país e do exterior, e deverá ser aberta para usuários externos em Setembro/97. Cerca de 30 projetos de estudos estruturais de diferentes proteínas já cristalizadas ou fase de cristalização já foram propostos, abrangendo estudos de enzimas, proteínas de plantas, toxinas, planejamento racional de drogas terapêuticas e vacinas, e enfocando projetos de grande interesse nacional.